人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒
關(guān)于樣本:我們在收集產(chǎn)品標本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標本盡早檢測,
對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮荆堅炷H〔暮螅瑢吮炯皶r分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復凍融.
人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒標本的采集及保存
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi),檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
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