載體蛋白偶聯
肽-載體蛋白銜接多用于制備抗毒素類抗體,單獨的單個通常通常小小的不足以激起充分的免疫反應,而帶有很多抗原
表位的載體蛋白有利于刺激輔助性T細胞,進一步誘導B細胞免疫反應。
合生生物偶聯蛋白主要如下幾種:
KLH(Keyhole Limpet Hemocyanin),即血藍蛋白,由于KLH比BSA有更高的免疫原性,因此是常被替換的載體蛋白。
BSA(牛血清白蛋白),即牛血清白蛋白,屬于十分穩定的和可溶的白蛋白。BSA的不利之處在于在很多實驗中,它被當
作封閉劑使用,如果多肽-BSA偶聯物的抗血清用于這樣的檢測分析中,通常會出現假陽性,因為這些血清含有抗BSA的
抗體。
OVA(Ovalbumin),即雞卵白蛋白,它可作為第*二載體蛋白去驗證抗體是否僅針對靶向而并非載體蛋白(如BSA)。
所有可攜帶的基基反應的功能基團經修飾都可被替換為發生共軛反應。合生生物偶聯反應,其中十分常見的有以下幾種:
碘乙酰胺(碘乙酰胺)
馬來摻雜(馬來酰亞胺)
烷基鹵(鹵代烷)
MAP與帶有載體蛋白的肽
在支鏈賴氨酸上合成四或八個拷貝的肽;因此,MAP肽的作用類似于大蛋白。
MAP肽直接與佐劑一起注射以產生抗體。不需要載體蛋白。
MAP技術有利于N末端或內部肽,因為該肽通過C末端連接。相反,KLH-結合傾向于C-末端肽。但是,KLH載體可能會
引起空間位阻。
由于MAP肽的結構,其滴度可能比KLH綴合的肽略高。MAP設計大大程度地提高了抗原濃度,因為合成的肽抗原占所得
產品總重量的95%。
使用MAP,每次都可以使用已知量的肽進行免疫,從而可以更好地控制實驗條件。