辣椒及其制品辣度ELISA檢測試劑盒
使用說明書
本品采用競爭性酶免檢測技術用于辣椒及其制品辣度的定量分析，最可滿足96次測試，在做復孔的情況下，一次最可檢測42個樣本。
產品特性： l 快速（＜10min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法 l 檢測限1度辣度，定量限2度辣度 l 快速，檢測時間30min l 高的重現性 |
【辣椒素辣度相關公式】 參考《GB/T 21266-2007 辣椒及其制品中 辣椒素類物質測定及辣度表示方法》 辣椒素和二氫辣椒素是影響辣度的最主要成分，二者占辣椒素類物質總量約90%，其余辣椒素類物質約占10% 辣椒素或二氫辣椒素轉換為斯科維爾指數的系數：1g/kg（辣椒素或二氫辣椒素）=16.1×103 其余辣椒素類物質轉換為斯科維爾指數的系數：1g/kg（其余辣椒素類物質）=9.3×103 辣度與斯科維爾指數（SHU）的換算關系為：150SHU=1度 綜上，辣度與1g/kg辣椒素類物質含量之間的換算公式 1g/kg辣椒素類物質總量=1×0.9×16.1×103SHU+1×0.1×9.3×103SHU=15.42×103SHU=15420/150度=102.8度 1g/kg(辣椒素類物質總量）=1000mg/kg 因此，10mg/kg辣椒素類物質總量=1.028度，辣椒素和二氫辣椒素換算為辣椒素類物質總量的系數：0.9 10mg/kg（辣椒素或二氫辣椒素）=1.028/0.9度=1.142度 |
請您提供產品貨號、批號、實驗數據等相關信息，以便能快速而高效的為您服務（貨號及批號見試劑盒外包裝） |
使用前須知 |
1. 當與儀器方法結果相比時，試劑盒的結果偏高這是很正常的現象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標分子且還能識別結構上相似的分子，包括其相關的代謝產物。因此，使用人員需要明白本產品的局限性和對數據做出合理的分析。 2. 任何試劑、檢測程序的改變都可能導致檢測失敗。 3. 不要使用超過有效期的產品；不同批次的產品不得混用。 4. 實驗用水的質量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。 5. 微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內使用完。 |
需要但未提供的設備和試劑 | |
l 酶標儀：配備450nm波長 l 單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支 l 多道移液器：30-300μL量程一支 l 白色、黃色和藍色吸頭若干 | l 恒溫培養箱 l 均質器或絞肉機 l 甲醇，分析純 l 二甲基亞砜，分析純 |
1.樣本前處理 |
準備 (1) 樣本提取液 分別取甲醇70mL和二甲基亞砜 30mL混勻備用。 (2) 1×樣本稀釋液 取4×樣本稀釋液1份，加入3份去離子水混勻，比如1mL+3mL 辣椒油、火鍋底料 火鍋底料、凝固性油樣，可以加熱至樣品溶化后再稱量 (1) 稱取0.2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min; (2) 4000rpm，離心5min； (3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻； (4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻 (5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻 稀釋倍數：1 干辣椒 粉碎后，過40目篩 (1) 稱取0.2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min; (2) 4000rpm，離心5min； (3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻； (4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻 (5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻 稀釋倍數：1 新鮮辣椒以及辣椒醬等辣椒制品 在均質器或料理機上均質呈勻漿 (1) 稱取0.2g均質的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min; (2) 4000rpm，離心5min； (3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻； (4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻 (5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×樣本稀釋液混勻 稀釋倍數：1
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2.檢測步驟 |
檢測前準備 l 所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）; l 檢測開始前需準備好所需試劑； l 取出所需體積的試劑，其余放回盒內； l 未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染； l 請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環境差異導致檢測失敗； l 標準品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應做有毒廢棄物處理。
洗液（1×）配制 取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻
檢測步驟 (1) (2) 移取50μL樣本至相應微孔中； (3) 移取50μL酶結合物至所有微孔中； (4) 加入50μL辣椒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側混勻1min； (5) 室溫（20-25℃）孵育20min； (6) (7) 加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育10min; (8) 加入100μL終止液，于450nm下讀數
結果計算 (1) 以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進行線性擬合。 其中公式如下 a. B為標準品或樣本對應的吸光度； b. B0為零標準品對應的吸光度； d. K為斜率； e. C為截距 (2) 計算出樣本的平均吸度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應的稀釋倍數，即為樣本中待測物最終濃度；辣度換算公式【求得的濃度C樣，（C樣×1.142）/10即為樣本的辣度 |
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