BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒兼具了傳統 RNAi 載體的優勢(穩定表達和使用病毒遞送的能力)與組織特異性表達和同一轉錄物中多次靶標基因敲低能力。BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒和 BLOCK-iT™ 慢病毒 Pol II miR RNAi 表達系統設計用于表達人工 miRNA,其經基因工程改造后具有靶序列 99% 同源性,將導致靶標切割。使用 Invitrogen’ 優質 BLOCK-iT™ RNAi Designer,70% 以上的構建體產生超過 70% 的敲低。Invitrogen Pol II 表達載體家族包括:
–CMV 立即早期啟動子的強表達,可選擇通過 MultiSite Gateway™ 重組使用組織特異性或其他調節啟動子。
–與許多用于基因表達的 Invitrogen’ Gateway™ 目的 (DEST) 載體的兼容性。
–使用新的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒(含 EmGFP)控制 RNAi 響應啟動的能力。
–含 EmGFP 的 BLOCK-iT™HiPerform™ 慢病毒 PolII miR RNAi 表達系統中一種新的目的載體。新載體含有一個 mRNA 穩定序列 (WPRE) 和一個核導入序列 (cPPT),可產生高達 5 倍的病毒滴度和 EmGFP 表達水平。此外,從小鼠 Pgk-1 啟動子中表達殺稻瘟菌素抗性,以避免多次傳代后關閉。
–祖母綠 GFP (EmGFP) 的協同順反子表達,導致 EmGFP 表達與 miR RNAi 敲低相關。
–在同一轉錄物上表達一個以上的經基因工程改造 miR RNAi 序列,允許同時敲低多個基因并產生合成表型
新的含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒提供了調節 RNAi 實驗的能力。該試劑盒含有 pT-REx-DEST30 Gateway™ 載體,在簡單克隆和穿梭技術后,產生適用于誘導型敲低的 miR RNAi 表達載體。pT-REx-DEST30 Gateway™ 載體包含帶有兩個四環素操縱基因 (tetO2) 序列拷貝的 CMV 啟動子,允許高水平和調節表達。這允許在穩定轉染細胞系中進行功能喪失研究,即使目的基因是必需的也可進行研究。此外,在基因功能恢復期間,可以停止 miR RNAi 表達的誘導,因此可以測量表型變化。
對于多種表達選項,包含 EmGFP(僅 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 載體)、miR 側翼區和與目標靶標同源的 miRNA 的 miR RNAi 盒可輕松地轉移到多種 DEST 載體中。這通過 Gateway™ 重組反應發生,在該反應中,將 miR RNAi 盒轉移至 pDONR™ 載體中(BP 反應),然后轉移至 DEST 載體中(LR 反應)。HiPerform™ 系統具有用于高病毒滴度和 EmGFP 表達的新 pLenti6.4/RF R2/V5-DEST 目的載體。
–CMV 立即早期啟動子的強表達,可選擇通過 MultiSite Gateway™ 重組使用組織特異性或其他調節啟動子。
–與許多用于基因表達的 Invitrogen’ Gateway™ 目的 (DEST) 載體的兼容性。
–使用新的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒(含 EmGFP)控制 RNAi 響應啟動的能力。
–含 EmGFP 的 BLOCK-iT™HiPerform™ 慢病毒 PolII miR RNAi 表達系統中一種新的目的載體。新載體含有一個 mRNA 穩定序列 (WPRE) 和一個核導入序列 (cPPT),可產生高達 5 倍的病毒滴度和 EmGFP 表達水平。此外,從小鼠 Pgk-1 啟動子中表達殺稻瘟菌素抗性,以避免多次傳代后關閉。
–祖母綠 GFP (EmGFP) 的協同順反子表達,導致 EmGFP 表達與 miR RNAi 敲低相關。
–在同一轉錄物上表達一個以上的經基因工程改造 miR RNAi 序列,允許同時敲低多個基因并產生合成表型
新的含 EmGFP 的 BLOCK-iT™ 誘導型 Pol II miR RNAi 表達載體試劑盒提供了調節 RNAi 實驗的能力。該試劑盒含有 pT-REx-DEST30 Gateway™ 載體,在簡單克隆和穿梭技術后,產生適用于誘導型敲低的 miR RNAi 表達載體。pT-REx-DEST30 Gateway™ 載體包含帶有兩個四環素操縱基因 (tetO2) 序列拷貝的 CMV 啟動子,允許高水平和調節表達。這允許在穩定轉染細胞系中進行功能喪失研究,即使目的基因是必需的也可進行研究。此外,在基因功能恢復期間,可以停止 miR RNAi 表達的誘導,因此可以測量表型變化。
對于多種表達選項,包含 EmGFP(僅 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 載體)、miR 側翼區和與目標靶標同源的 miRNA 的 miR RNAi 盒可輕松地轉移到多種 DEST 載體中。這通過 Gateway™ 重組反應發生,在該反應中,將 miR RNAi 盒轉移至 pDONR™ 載體中(BP 反應),然后轉移至 DEST 載體中(LR 反應)。HiPerform™ 系統具有用于高病毒滴度和 EmGFP 表達的新 pLenti6.4/RF R2/V5-DEST 目的載體。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.