Thermo Scientific Pierce 活性 Rho 沉降和檢測試劑盒能夠通過與 Rhotekin 蛋白結合結構域的特異性蛋白相互作用選擇性地富集和檢測 GTP 結合 Rho GTPase。

活性 Rho 沉降和檢測試劑盒包括純化的 GST-Rhotekin Rho 結合結構域 (RBD)、瓊脂糖樹脂、陽性和陰性對照品（分別為 GTPγS 和 GDP）、裂解/結合/洗滌緩沖液、抗 Rho 抗體、二抗、樣品緩沖液、離心柱和收集管。該試劑盒使用 NIH 3T3 細胞的裂解物進行驗證，已知該細胞系具有穩健的 Rho 活性。

活化 Rho 沉降和檢測試劑盒的特點：

?高靈敏度和精確度—優化試劑、特異性泛抗 Rho 抗體和 Western 印跡程序可確保精確控制和半定量結果
?經驗證—對 Rho 檢測進行功能檢測，以確保質量和性能
?兼容—對小鼠、大鼠和人來源的多種細胞類型有效

應用：
? 追蹤細胞分化、遷移、分裂和細胞骨架重排期間的 Rho GTPase 活化
? 研究應激纖維形成期間 Rho 的活化
? 監測使用生長因子刺激后的 Rho 活性
? 篩查小分子抑制劑對 Rho 活性的影響

使用經用于活化內源性 Rho 的 GTPγS 處理的細胞裂解物相對于經滅活小 GTPase 的 GDP 處理的裂解物，驗證了活化 Rho 沉降和檢測試劑盒的活化 Rho 的功能和特異性。GTPγS 處理捕獲 GTP 結合活化形式的 Rho，在存在內源性 Rho 時產生強烈信號。GDP 處理使 Rho 進入 GDP 結合狀態（非活化），無論 Rho 蛋白水平如何均幾乎不產生信號。該試劑盒針對使用 HRP 偶聯的二抗（包括）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化學發光底物（單獨提供，產品編號 34080）進行的 Western 印跡檢測進行了優化。試劑盒均包含足夠用于 30 次沉降實驗的組成部分。

試劑盒組成部分也可用于免疫熒光染色。使用試劑盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Rho 抗體，通過 NGF 刺激神經元 NS-1 細胞以研究活性 Rho 的空間分布。

Rho 背景：
Rho 系列 GTPase 可服務于許多細胞功能，包括細胞信號轉導、轉錄調節以及肌動蛋白細胞骨架的組織。該 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。這些 GTPase 通過 GPCR、激酶、細胞因子和黏附受體實現從質膜到細胞溶質的信號轉導。通過蛋白羧基末端的香葉酰香葉酰脂質修飾來實現與質膜的黏附。通過 Rho GTPase 的信號轉導導致應力纖維中肌動蛋白重組并形成局灶性粘連。RhoA 定位于細胞溶質和質膜，而 Rho B 定位于質膜和膜囊泡。與 RhoA 類似，RhoC 為細胞溶質，但它定位于核周區域。

Rho GTPase 與 GEF、GAP、GDI 和效應蛋白相互作用進行信號轉導。Rho GTPase 有 30 多種哺乳動物 GEF，每個 GEF 含一個用于核苷酸交換反應的 DBl 同源結構域、一個普列克底物蛋白同源結構域和用于蛋白-蛋白相互作用的額外特異性結構域。Rho Gap 蛋白促進 GTP 水解，GDI 蛋白使細胞質和膜之間的 Rho GTPase 轉位，并抑制 Rho GEF 的 GDP/GTP 交換。GEF 和 GDI 與 Rho 和 Gα 亞單元的相互作用是通過 GPCR 進行信號轉導所必需的。其中一些效應蛋白包括 p160 Rho 激酶（一種參與應激纖維形成的/激酶）、p140mDia（可觸發肌動蛋白細胞骨架的重組）和 Rhotekin（一種介導信號轉導以激活 NF-κB 的/激酶支架蛋白）。Rho 家族 GTPase 可在細胞信號轉導期間發揮激動作用以及在分化期間發揮拮抗作用。

更多產品數據
?通過特異性下游效應子測定小 GTPase 的激活
?在神經元細胞分化過程中檢測和定位活性 GTPase