腺病毒igg抗體檢測(cè)試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:腺病毒IgG檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱:NovaLisa® Adenovirus IgG ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】
96T
【預(yù)期用途】
本試劑盒可用于定性檢測(cè)人血清或血漿(檸檬酸鹽、肝素)中抗腺病毒igg的特異性抗體。
【前言簡(jiǎn)介】
腺病毒是一種長(zhǎng)度約為70-90納米的雙鏈DNA病毒。衣殼包含252個(gè)殼粒,呈二十面體對(duì)稱。衣殼由六鄰體、戊鄰體和纖維蛋白三聚體組成,它們負(fù)責(zé)誘導(dǎo)群型和類型特異性抗體。1953年,Rowe從扁桃體和腺樣組織中分離出腺病毒。目前已知的有80多種腺病毒。其中47例對(duì)男性有致病性。它們會(huì)引起多種不同器官系統(tǒng)的疾病,主要是眼睛、咽、呼吸和胃腸道系統(tǒng)。腺病毒感染是一種常見(jiàn)和常見(jiàn)的疾病,腺病毒igg的確認(rèn)可以有利于該病毒感染的早發(fā)現(xiàn)早確認(rèn),縮短疾病窗口期以阻止重癥的可能性。大多數(shù)感染出現(xiàn)在兒童時(shí)期。它們潛伏通過(guò),以便兩年后仍能在扁桃體中檢測(cè)到病毒。它通過(guò)唾液和糞便排泄。到身體的大門(mén)是口腔、鼻咽和眼的結(jié)膜。大多數(shù)感染在傳播時(shí)都沒(méi)有出現(xiàn)任何癥狀,但可以檢測(cè)到腺病毒igg。大約5%的兒童咳嗽和打噴嚏是由腺病毒引起的。流行病可能發(fā)生在擁擠的人群中,例如軍人群體中的急性呼吸道疾病、游泳池中的咽結(jié)膜熱和醫(yī)療設(shè)施中的流行性角膜結(jié)膜炎。醫(yī)院和游泳池的感染滿足了對(duì)衛(wèi)生學(xué)的特殊要求。
【檢測(cè)原理】
特異性腺病毒igg抗體的定性免疫酶學(xué)測(cè)定是基于ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))技術(shù)。微孔板上包被特定的抗原,以結(jié)合樣品的相應(yīng)抗體。洗滌微孔以去除所有未結(jié)合的樣品材料后,添加酶聯(lián)物,與捕獲的抗體結(jié)合。在第二個(gè)洗滌步驟中,未結(jié)合的共軛物被去除。通過(guò)加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物,得到藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物,可以觀察到結(jié)合結(jié)合物形成的免疫復(fù)合物。該產(chǎn)品的強(qiáng)度與樣品中特異性抗體的數(shù)量成正比。加入終止液以終止反應(yīng),藍(lán)色變成了黃色。使用酶標(biāo)儀器讀取450/620nm處的吸光度從而判斷腺病毒igg的存在。
【試劑盒組成】
1)微孔板 12x8,包被腺病毒抗原
2)樣品稀釋液 1×100ml,磷酸鹽緩沖液(10mM),pH 7.2 ± 0.2,即用型
3)終止液 1×15ml,硫酸,0.2mol/L,即用型
4)洗滌濃縮液 20倍濃縮,磷酸鹽緩沖液(0.2M),1×50ml,pH 7.2 ± 0.2
5)酶聯(lián)物 1×20ml,過(guò)氧化物酶標(biāo)記的人IgG抗體,即用型
6)底物液 1×15ml,3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB),即用型
7)陽(yáng)性質(zhì)控 1×2ml,即用型
8)臨界質(zhì)控 1×3ml,即用型
9)陰性質(zhì)控 1×2ml,即用型
10)封板紙 1x
11)使用說(shuō)明書(shū) 1x
【所需的材料和設(shè)備】(未提供)
1)酶標(biāo)儀
2)37℃培養(yǎng)箱
3)手動(dòng)或自動(dòng)洗板裝置
4)移液器:10-1000µL
5)渦旋混合器
6)蒸餾水
7)一次性試管
【儲(chǔ)存條件】
腺病毒igg抗體檢測(cè)試劑盒必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境中,打開(kāi)的試劑在標(biāo)簽上規(guī)定的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【試劑準(zhǔn)備】
將所有的試劑和樣品平衡至室溫(20-25°C),并在開(kāi)始測(cè)試運(yùn)行前進(jìn)行混合是非常重要的!有將有利于對(duì)腺病毒igg的檢測(cè)實(shí)施。
洗滌液
用蒸餾水根據(jù)1+19稀釋洗滌濃縮液,例如,10 mL洗滌濃縮液+190mL蒸餾水混合。稀釋的洗滌液在室溫下(20-25℃)可保存5天,如果在濃縮液中出現(xiàn)晶體,則將溶液加熱至37°C,例如在水浴中。稀釋前攪拌均勻。
底物液
試劑為即用型,不需要稀釋。必須儲(chǔ)存在2-8°C,避光。溶液應(yīng)該是無(wú)色的,或者可以有一個(gè)輕微的藍(lán)色色調(diào)。如果基質(zhì)變成藍(lán)色,它可能已經(jīng)被污染了,應(yīng)該被扔掉。
【樣品采集和制備】
使用人血清或血漿(檸檬酸、肝素)樣品。如果在樣品采集后5天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),樣品應(yīng)保持在2-8°C;否則應(yīng)分裝并深度冷凍保存(-70至-20°C)。如果樣品是冷凍保存的,在檢測(cè)前將解凍的樣品混合。避免反復(fù)凍結(jié)和解凍。不建議對(duì)樣品進(jìn)行熱失活。
樣品稀釋
腺病毒igg檢測(cè)前,所有樣品應(yīng)用IgG樣品稀釋緩沖液稀釋1+100。將10µL樣品和1 mL IgG樣品稀釋緩沖液加入試管中,渦旋混勻。
檢測(cè)步驟
1)加100µL標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品和稀釋的樣品至相應(yīng)的微孔中,保留A1為空白對(duì)照。
2)用提供的封板紙封板。
3)37± 1 °C孵育1小時(shí)± 5 分鐘。
4)棄掉微孔中的內(nèi)容物,用稀釋的洗滌液沖洗孔3次(每次每孔300µL)。洗滌和吸入的時(shí)間間隔應(yīng)>5s。在吸水紙上用力擊打微孔板,以去除殘留的液滴。
5)加100µL酶聯(lián)物至每個(gè)微孔中,除了空白孔。
6)室溫下(20-25℃)避光孵育30分鐘。
7)重復(fù)步驟4。
8)加100µL底物液至每個(gè)微孔中。
9)在黑暗環(huán)境中室溫下孵育15分鐘。
10)加100µL終止液至每個(gè)微孔中。
11)在加入終止液溶液后的30分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀讀取在450/620nm處的吸光度可以判斷腺病毒igg的檢測(cè)結(jié)果。
【測(cè)量方法】
使用空白對(duì)照孔,將酶標(biāo)儀調(diào)零。
如果由于技術(shù)原因,酶標(biāo)儀不能使用孔板空白值調(diào)零,則從所有其他測(cè)量的吸光度值中減去其吸光度值,以獲得可靠的結(jié)果!
在450nm處測(cè)量所有孔的吸光度,并在微孔板布局中記錄每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)/質(zhì)控和樣品的吸光度值。
推薦使用620nm的參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙色測(cè)量。
【結(jié)果】
運(yùn)行驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn):
為了使試驗(yàn)運(yùn)行有效,必須嚴(yán)格遵守這些使用說(shuō)明,并必須滿足以下標(biāo)準(zhǔn):
空白對(duì)照:吸光度值<0.100
陰性質(zhì)控:吸光度值<0.200和<臨界值
臨界質(zhì)控:吸光度值0.150-1.300
陽(yáng)性質(zhì)控:吸光度值>臨界值
如果不滿足這些標(biāo)準(zhǔn),則該檢測(cè)無(wú)效,必須重復(fù)檢測(cè)。
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