miRNA qPCR Kit miRNA熒光定量PCR試劑盒 產品信息
| 產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
| HRbio™ miRNA qPCR Kit miRNA熒光定量PCR試劑盒 | HRF0711 | 50T |
產品描述
HRbio™ miRNA qPCR Kit采用 SYBR Green I嵌合熒光法的原理進行miRNA的熒光定量檢測。本產品包含miRNA qPCR所需要的所有試劑，組分分別是：2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。其中2×miRNA qPCR Mix（含SYBR Green）是專門為miRNA熒光定量檢測而特別研發的新一代預混液形式的qPCR試劑。其中DNA polymerase采用的是抗體修飾的熱啟動形式，配合特殊的buffer體系，使得反應特異性更好，靈敏度更高，并且在更廣的范圍內進行準確定量。
產品組分
| 編號 | 組分 | HRF0711（125次×20 μl） |
| HRF071-A | 2×miRNA qPCR Mix(with SYBR Green I) | 1.25 mL |
| HRF071-B | Reverse primer（10μM） | 55 μL |
運輸與保存方法
1.-20°C 避光保存至少 12 個月，使用前充分融解混勻。
2.2 ×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在 4°C，避免反復凍融。
3.Reverse primer(10μM )每次用完置-20°C 保存。
注意事項
1.miRNA 鏈cDNA 的加入量不要超過real time PCR 體積1/10。
2.對于特殊的檢測體系中，高含量的cDNA 模板易導致非特異性擴增，根據所檢測miRNA 的豐度適當的稀釋cDNA（5-10倍或者100倍）。
3.本品中含有熒光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反應液時應避免強光照射。
4.2 x miRNA qPCR Mix不含參比染料ROX，客戶并根據qPCR儀器技術指導決定是否需要加ROX參比染料，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差
5.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6.本產品僅作科研用途！
操作步驟
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在室溫融化2 ×miRNA qPCR Mix和Reverse primer（10μM）。
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使用時請將2 ×miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經輕微離心后使用。如果試劑沒有混勻，其反應性能會有所下降。注：請不要使用振蕩器混勻。
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按照下表組分冰上進行反應液的配制：
| 組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
| 2×miRNA qPCR Mix | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
| Reverse Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
| miRNA鏈cDNA模板 | X | X | - |
| 無菌超純水 | To 50 | To 20 | - |
熒光定量PCR試劑盒
【注】： 使用前務必充分混勻， 避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1- 1.0 μM之間進行調整。
b) 模板濃度：如模板類型為未稀釋cDNA原液，使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。
c) 模板稀釋：cDNA原液建議5- 10倍稀釋，模板加入量以擴增得到的CT值在20-30個循環為好。
d) 反應體系：推薦使用20μL或50 μL ，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
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