EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(適用于FACS、FM)
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(適用于FACS、FM) | HR0424 | 50-500T |
產(chǎn)品描述
EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(FuHeng EdU Cell Proliferation Kit with AlexaFluor 488)，是一種利用核苷滲入法對細胞增殖情況進行快速、 簡單、高靈敏檢測的試劑盒。其原理為：試劑盒中的EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)是一種胸苷(T)類似物，EdU可以在在 細胞周期的S期中替代胸苷摻入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能與疊氮 化物(如熒光探針Alexa Fluor 488 Azide)通過Cu+的催化發(fā)生共價反應，形成穩(wěn)定的三唑 環(huán)，該反應非常迅速，被稱作點擊反應(Click reaction) (圖1) 。通過點擊反應，新合成的DNA會被綠色熒光標記，然后通過檢測熒光信號實現(xiàn)細胞增殖的檢測。
圖1. EdU法中的點擊反應原理圖。 摻入到細胞DNA中的EdU與熒光探針或sws等標記的疊氮化物，在銅離子的催化下發(fā)生共價反應，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，使細胞DNA標記上熒光探針或sws。
<p 細胞增殖檢測是評估細胞活性、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果等的基礎實驗手段。 細胞增殖檢測的方法按照原理通常可以分為五類：膜損傷檢測、代謝活性檢測、ATP水平測定、 DNA合成檢測和細胞熒光標記檢測法。目前的的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成，即核苷滲入法。以前常用的核苷滲入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸類似物)法，但BrdU法的缺點是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，導致了DNA雙鏈結(jié)構的破壞，影響了其他染料的結(jié)合染色，導致染色彌散，準確性降低等問題。 EdU法作為新型的核苷滲入法具有以下優(yōu)點：
◆安全-----不使用[3H]thymidine，無放射性污染。
◆ 簡單-----基于小分子化學反應的檢測方法，簡單高效，僅需三步： EdU孵育；細胞固定；熒光檢測。無需DNA變性和孵育抗體。
◆ 快速-----無需過夜，省卻抗原抗體反應。整個檢測過程只需 2.5 小時，大大縮短實驗周期。
◆ 準確-----標記率高且無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完。
◆ 靈敏-----無需抗體，檢測染料僅為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細胞也能準確檢測。
◆ 兼容-----對樣品幾乎無損傷，允許與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。
本試劑盒適用于培養(yǎng)的細胞或組織樣品，也適用于組織切片，可以檢測到細胞或組織樣本中的單個增殖細胞，也可以對細胞或組織樣本總體的細胞增殖情況進行定量分析。本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組份，同時提供了藍色細胞核染料Hoechst 33342，可以用來復染所有細胞核，也可用于細胞周期分析。使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀或熒光酶標儀進行檢測， 也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。
光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518 nm；Hoechst 33342：藍色熒光， Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品組成 | HR0424 50-500T |
EdU(10mM) | 200 μl |
488-Azide | 55 μl |
Click-iT Reaction Buffer | 30 ml |
CuSO4 | 1.1 ml |
Click-iT Additive | 2 管 (Add 1.3ml/tube ddH2O to dissolve) |
Hoechst 33342(1000X) | 50 μl |
運輸和保存方法
-20℃保存， 一年有效。488-Azide和Hoechst 33342(1000X)須避光保存。
使用方法
需自備試劑
（1）10mM PBS, pH7.2-7.6
（2）固定液-----4%多聚甲醛in PBS 。
（3）洗滌液-----3% BSA in PBS , pH7.2-7.6。
（4）通透液-----0.3~0.5% Triton X-100 in PBS。
（5）去離子水或超純水。
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