反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
產品名稱 | 熱帶念珠菌PCR檢測試劑盒價格 |
英文名稱 | Candida tropicalisPCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。?
使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
頭孢菌素紙片(30ug/片)10g 10片/瓶Phytic acid sodium salt hydrate植酸鈉
改良馬丁瓊脂培養基顆粒10mg/100mg/1g 250g玉米素/植物細胞分裂素/ZT/Zeatin
人粘蛋白12(MUC12)ELISA試劑盒100mg 0.625-40 ng/mL4-基-2-氧代酸鈣 CALCIUM 4-METHYL-2-OXOVALERATE(P)
人11β羥基類固脫氫酶1型(HSD11b1)ELISA試劑盒78919-28-55mg Chicanin 0.156-10 ng/mL襄五脂素
ELISAKitforHumanRho-associatedproteinkinase2100mg 1.56-100 ng/mL啶酸鉻 CHROMIUM(III)PICOLINATE(P)
非洲綠猴腎細胞,VERO細胞適用各種普通自動生化分析儀、酶標儀1 x 10^6 cells/T25培養瓶肌酸激酶同功酶(CK-MB)試劑盒
Periostin/POSTN/OSF-2抗體,兔多抗,抗原親和純化250mgELISA IHC-P 芹菜素 APIGENIN(RG)
豬圓環病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒 20mg8-O-ethylyunaconitine HPLC≥98% 0.312-20 ng/mL8-乙氧基滇烏堿
CNDP1抗體,鼠單抗 120-82-1 1g 0.997ELISA 1,2,4-三氯苯
ELISAKitforHumanCelladhesionmolecule320315-25-7 20mgProcyanidin B1 HPLC≥97% 0.312-20 ng/mL原花青素B1;原矢車菊B1
人吞蛋白A2(Endophilin-A2)ELISA試劑盒1g 0.78-50 ng/mL醋酸去氫表雄 DEHYDROISOANDROSTERONE ACETATE(DHEA ACETATE)(RG)
人蛋白酶活化受體4(PAR-4)ELISA試劑盒 1802-12-6 20mg Phytolaccagenin 0.312-20 ng/mL商陸皂苷元
XCL2抗體,鼠單抗10338-51-9C14H20O7Salidroside≥98%ELISA 紅景天苷
ELISAKitforHumanKlotho 7.8-500 pg/mL(6-溴-2-萘基)-α-D-半糖苷 BROMO-2-NAPHTHYL-a-D-GALACTOPYRANOSIDE, 6-(RG)(PLEASE CALL)
腦心浸液肉湯100mg 250gNBT 氯化硝基四氮唑藍
人血小板活化因子乙酰水解酶(PAFacetylhydrolase)ELISA試劑盒1mg 93.75-6000 pg/mLSt. John's Wort (Hypericum perforatum) Aerial Extract #2 BXL(REQUEST QUOTE)
熱帶念珠菌PCR檢測試劑盒價格蘆薈寧 ALOENIN A(SH) 5mg 人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒
七葉膽苷XVII HPLC≥98% A0638 CarboxypeptidaseA2/CPA2抗體,鼠單抗 20mg/支
草質素苷 HPLC≥98% 85571-15-9 CD112/Nectin-2/PVRL2抗體,兔多抗,抗原親和純化
圣草 HPLC≥98% Eriodictyol 小鼠結腸平滑肌細胞 用于含量測定
土荊皮酸 20mg Pseudolaric acid A ELISAKitforHumanFicolin-2
羥基積雪草酸 20mg Madecassic acid 人集聚蛋白(Agrin)ELISA試劑盒 HPLC≥98%
N-乙酰-L-谷氨酰胺/乙酰谷酰胺 ACETYL-L-GLUTAMINE, N-(RG) 1g ELISAKitforHumanSpermprotamineP1
大黃酸 C15H8O6 Rhein BLVRB/biliverdinreductaseB抗體,鼠單抗 ≥98%