特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產品名稱 | 毛細線蟲通用PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Capillaria spp.PCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。?
使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
ELISAKitforGlutamine100286-90-6 20mg Irinotecan hydrochloride 0.39-25 ng/mL鹽酸伊立替康
BPI抗體,兔多抗17086-76-9C29H44O8Cyasterone≥98%ELISA 杯莧甾
人溶血磷脂酸受體4(LPAR4)ELISA試劑盒25ML 0.312-20 ng/mL2-丁 2-Butanol >99.0%(GC)
酶試紙100ml 10片吐溫-80 聚山梨酯-80
ELISAKitforHumanTrypsin-11mg 15.6-1000 pg/mLMallow (Malva neglecta) Aerial Extract #6 BXL(REQUEST QUOTE)
大豆分離蛋白/豆蛋白質/大豆蛋白/分離蛋白/Soyproteinisolate923-27-3BR,90%D-賴氨酸 S20399 1g 428 923-27-3
ELISAKitforHumanPuromycin-sensitiveaminopeptidase10mg 0.312-20 ng/mLANAGYRINE PERCHLORATE(P)(PLEASE CALL)
兔單核細胞 20mg HPLC≥98%Rosiridin用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養瓶絡塞定
IFNGR1/CD119/IFN-gamma-R1抗體,兔單抗5mgELISA WB 異補骨脂素 ANGELICIN (BAKUCHICIN)(RG)
ELISAKitforCysteine65-19-0 20mgYohimbine Hydrochloride HPLC≥98% 0.312-20 ng/mL鹽酸育亨賓
SIRPalpha/CD172a抗體,兔多抗,抗原親和純化1835927HPLC≥98%A033520mg/支ELISA IP 哈巴苷
人Ⅲ型脫酶ELISA試劑盒58479-68-8 20mg Platycodin D 0.156-10 ng/mL桔梗皂苷D
HAGH抗體,兔單抗75629-19-5C40H36O11kuwanon G≥98%ELISA 桑黃G
雙料糖膽鹽發酵培養基管(含小倒管)共軛級,4500u/mg,小牛腸,甘油溶液 10ml*20支/包堿性磷酸酶/堿性磷酸酯酶
ELISAKitforHumanMembranemetallo-endopeptidase-like15G 31.2-2000 pg/mL3-丁氧基苯 3-Butoxyphenol >96.0%(GC)
革蘭氏陰性菌增菌液2.04706.782 250gNBB-增菌培養液(NBB-B -AM)
毛細線蟲通用PCR檢測試劑盒阿魏酸 HPLC≥98% 1135-24-6 Integrinbeta1/ITGB1抗體,兔多抗,抗原親和純化
白果內酯 HPLC≥98% 33570-04-6 OLIG1抗體,兔多抗,抗原親和純化
鈹試劑 III Beryllon III 5G 人腎臟腦蛋白(KIBRA)ELISA試劑盒
細辛脂素;細辛素 20mg Asarinin ELISAKitforHumanBreastcancertype2susceptibilityprotein HPLC≥98%
2-溴異丁酸乙酯 Ethyl 2-Bromoisobutyrate >98.0%(GC) 25G ELISAKitforHumanMyosinregulatorylightpolypeptide9
苦瓜果提取物#3 Bitter Melon-Indochinese (Momordica charantia) Fruit Extract #3 BXL(REQUEST QUOTE) 1mg ELISAKitforHumanToll-likereceptor7
蒼術素 HPLC≥98% A0547 FGF10/KGF2抗體,鼠單抗 20mg/支
Sephadex G-15medium(葡聚糖凝膠G-15) 25g 大腸菌群顯色培養基