腺病毒igg抗體檢測試劑盒

【產品名稱】

通用名稱：腺病毒IgG檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：NovaLisa® Adenovirus IgG ELISA

【產品規格】

96T

【預期用途】

本試劑盒可用于定性檢測人血清或血漿（檸檬酸鹽、肝素）中抗腺病毒igg的特異性抗體。

【前言簡介】

腺病毒是一種長度約為70-90納米的雙鏈DNA病毒。衣殼包含252個殼粒，呈二十面體對稱。衣殼由六鄰體、戊鄰體和纖維蛋白三聚體組成，它們負責誘導群型和類型特異性抗體。1953年，Rowe從扁桃體和腺樣組織中分離出腺病毒。目前已知的有80多種腺病毒。其中47例對男性有致病性。它們會引起多種不同器官系統的疾病，主要是眼睛、咽、呼吸和胃腸道系統。腺病毒感染是一種常見和常見的疾病，腺病毒igg的確認可以有利于該病毒感染的早發現早確認，縮短疾病窗口期以阻止重癥的可能性。大多數感染出現在兒童時期。它們潛伏通過，以便兩年后仍能在扁桃體中檢測到病毒。它通過唾液和糞便排泄。到身體的大門是口腔、鼻咽和眼的結膜。大多數感染在傳播時都沒有出現任何癥狀，但可以檢測到腺病毒igg。大約5%的兒童咳嗽和打噴嚏是由腺病毒引起的。流行病可能發生在擁擠的人群中，例如軍人群體中的急性呼吸道疾病、游泳池中的咽結膜熱和醫療設施中的流行性角膜結膜炎。醫院和游泳池的感染滿足了對衛生學的特殊要求。

【檢測原理】

特異性腺病毒igg抗體的定性免疫酶學測定是基于ELISA（酶聯免疫吸附試驗）技術。微孔板上包被特定的抗原，以結合樣品的相應抗體。洗滌微孔以去除所有未結合的樣品材料后，添加酶聯物，與捕獲的抗體結合。在第二個洗滌步驟中，未結合的共軛物被去除。通過加入四甲基聯苯胺(TMB)底物，得到藍色反應產物，可以觀察到結合結合物形成的免疫復合物。該產品的強度與樣品中特異性抗體的數量成正比。加入終止液以終止反應，藍色變成了黃色。使用酶標儀器讀取450/620nm處的吸光度從而判斷腺病毒igg的存在。

【試劑盒組成】

1）微孔板                12x8，包被腺病毒抗原

2）樣品稀釋液          1×100ml，磷酸鹽緩沖液（10mM），pH 7.2 ± 0.2，即用型

3）終止液     1×15ml，硫酸，0.2mol/L，即用型

4）洗滌濃縮液   20倍濃縮，磷酸鹽緩沖液（0.2M），1×50ml，pH 7.2 ± 0.2

5）酶聯物     1×20ml，過氧化物酶標記的人IgG抗體，即用型

6）底物液     1×15ml，3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺（TMB），即用型

7）陽性質控    1×2ml，即用型

8）臨界質控    1×3ml，即用型

9）陰性質控    1×2ml，即用型

10）封板紙     1x

11）使用說明書   1x

【所需的材料和設備】（未提供）

1）酶標儀

2）37℃培養箱

3）手動或自動洗板裝置

4）移液器：10-1000µL

5）渦旋混合器

6）蒸餾水

7）一次性試管

【儲存條件】

腺病毒igg抗體檢測試劑盒必須儲存于2-8℃的環境中，打開的試劑在標簽上規定的有效期內是穩定的。

【試劑準備】

將所有的試劑和樣品平衡至室溫(20-25°C)，并在開始測試運行前進行混合是非常重要的！有將有利于對腺病毒igg的檢測實施。

洗滌液

用蒸餾水根據1+19稀釋洗滌濃縮液，例如，10 mL洗滌濃縮液+190mL蒸餾水混合。稀釋的洗滌液在室溫下（20-25℃）可保存5天，如果在濃縮液中出現晶體，則將溶液加熱至37°C，例如在水浴中。稀釋前攪拌均勻。

底物液

試劑為即用型，不需要稀釋。必須儲存在2-8°C，避光。溶液應該是無色的，或者可以有一個輕微的藍色色調。如果基質變成藍色，它可能已經被污染了，應該被扔掉。

【樣品采集和制備】

使用人血清或血漿（檸檬酸、肝素）樣品。如果在樣品采集后5天內進行檢測，樣品應保持在2-8°C；否則應分裝并深度冷凍保存(-70至-20°C)。如果樣品是冷凍保存的，在檢測前將解凍的樣品混合。避免反復凍結和解凍。不建議對樣品進行熱失活。

樣品稀釋

腺病毒igg檢測前，所有樣品應用IgG樣品稀釋緩沖液稀釋1+100。將10µL樣品和1 mL IgG樣品稀釋緩沖液加入試管中，渦旋混勻。

檢測步驟

1）加100µL標準品或質控品和稀釋的樣品至相應的微孔中，保留A1為空白對照。

2）用提供的封板紙封板。

3）37± 1 °C孵育1小時± 5 分鐘。

4）棄掉微孔中的內容物，用稀釋的洗滌液沖洗孔3次(每次每孔300µL)。洗滌和吸入的時間間隔應>5s。在吸水紙上用力擊打微孔板，以去除殘留的液滴。

5）加100µL酶聯物至每個微孔中，除了空白孔。

6）室溫下（20-25℃）避光孵育30分鐘。

7）重復步驟4。

8）加100µL底物液至每個微孔中。

9）在黑暗環境中室溫下孵育15分鐘。

10）加100µL終止液至每個微孔中。

11）在加入終止液溶液后的30分鐘內，用酶標儀讀取在450/620nm處的吸光度可以判斷腺病毒igg的檢測結果。

【測量方法】

使用空白對照孔，將酶標儀調零。

如果由于技術原因，酶標儀不能使用孔板空白值調零，則從所有其他測量的吸光度值中減去其吸光度值，以獲得可靠的結果！

在450nm處測量所有孔的吸光度，并在微孔板布局中記錄每個標準/質控和樣品的吸光度值。

推薦使用620nm的參考波長進行雙色測量。

【結果】

運行驗證標準：

為了使試驗運行有效，必須嚴格遵守這些使用說明，并必須滿足以下標準：

空白對照：吸光度值<0.100

陰性質控：吸光度值<0.200和<臨界值

臨界質控：吸光度值0.150-1.300

陽性質控：吸光度值>臨界值

如果不滿足這些標準，則該檢測無效，必須重復檢測。

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