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公司動態

ELISA檢測

發布時間:2017-11-30

ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技術。酶聯免疫吸附實驗的規范程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再參加一級檢測抗體(primarydetection Ab),構成一個抗原抗體的復合物。若是該抗體現已用酶(enzyme)符號了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可運用另一個酶符號的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的辦法是參加該酶的底質(substrate),作用后發作呈現的色彩深淺和樣本中的抗原量呈正比的,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。

 

1.直接法(direct ELISA) 

將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

優勢:操作手續簡略,因無須運用二抗可防止交互反響。

缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。

 

2.間接法(indirect ELISA) 

此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

優勢:二抗能夠加強信號,并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它zui多的免疫反響性。

缺陷:交互反響發作的機率較高。

 

3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA) 

被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原部位。

優勢:高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。

缺陷:抗原必定得具有兩個以上的抗體部位。

 

4.競爭法(competitive ELISA) 

樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。

優勢:可適用比擬不純的樣本,并且數據再現性很高。

缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。

 

ELISA技術: 

根據細胞法(cell-based ELISA):

是一種新的定性蛋白檢測技術,將細胞直接在微孔板里培育,待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經影響或抑制作用后的改變。

優勢:無需裂解細胞,所以方針蛋白丟失zui少,可測定完好細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。

缺陷:不能測定抗原量。


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