熒光染料簡易指南
熒光染料簡易指南
熒光染料(或稱熒光素)常用作細胞成像和流式細胞術等多種應用的檢測試劑。熒光染料可吸收特定波長的光能,然后以更長的波長重新發射光能。熒光染料吸收和發射光的波長分別構成熒光染料的激發和發射光譜(或簡稱為熒光染料光譜)。
流式細胞儀或其它需要使用熒光染料的儀器配備有激光器,激光器能產生特定波長的光,從而激發能吸收該特定波長的光的熒光染料。然后該熒光染料發射的光通過濾光鏡,因此每個傳感器只能檢測到一定范圍內的被濾光鏡濾過的熒光。所檢測的熒光即為儀器所識別的信號。
目前已研發了許多不同的熒光染料,每種都具有特定的發射和激發光譜。現在,在整個可見光譜范圍(包括紅外區域)內可以吸收并發射特定波長的光的熒光染料都已經商品化。此外,熒光染料發射光的強度也有區別。熒光染料的亮度取決于其吸收光的能力和吸收光轉化為發射光的效率。
如果不借助合適的工具,選擇適用于后續實驗的熒光染料可能比較困難。如果所設計的實驗為需要兩種或更多種熒光染料的多色實驗時, 選擇熒光染料將變得更加困難。在多色實驗中,必須注意熒光染料之間的光譜重疊以及其它因素,才能盡量減少可能出現的問題,例如熒光溢出。
R-PE-Cy7
Cy7
APC-Cy7
AF700
APC-Cy5.5
PerCP-Cy5.5
DRAQ5
PerCP
AF647
R-PE-Cy5.5
R-PE-Cy5
Cy5
APC
7-AAD
TR
AF594
R-PE-TR
PI
AF568
R-PE
AF555
Cy3
FITC
AF488
GFP
PB
BV421
AF405
DAPI