基于比色度/熒光性的蛋白定量方法(總蛋白質/肽含量):
一、BCA法(測定范圍:5~2000 pg/ml):基于比色度的蛋白定量方法
原理
蛋白質分子中的肽鍵在堿性條件下能與Cu2+絡合生成絡合物,同時將Cu2+還原成Cu+。二喹啉甲酸及其鈉鹽是一種溶于水的化合物,在堿性條件下,可以和Cu+結合生成深紫色的化合物,這種穩定的化合物在562nm處具有強吸收值,并且化合物顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。故可用比色的方法確定蛋白質的含量。
操作步驟
1、繪制標準曲線
以牛血清白蛋白含量為橫坐標,以吸光值為縱坐標。
2、樣品測定
向樣品中加入BCA試劑,搖勻,于37℃保溫30min,冷卻至室溫后在595nm處比色。
3、根據樣品的吸光值從標準曲線上查出樣品的蛋白質含量。

樣品測定濃度范圍:在5~2000 ug/ml
標準方案:37°C,30分鐘(檢測范圍=20-2000ugmL)
室溫方案:室溫,2小時(檢測范圍=20-2000ug'mL)
增強方案:60°C,30分鐘(檢測范用=5-250mg/mL)

二、Qubit® 法(測定范圍:12.5 μg/mL~5mg/mL):基于熒光性的蛋白定量方法
原理
Qubit@ 分析試劑盒測定樣品中的可溶性蛋白。靠熒光染料與蛋白質特意結合后發出熒光,再檢測產生熒光量的多少來定量。這個方法能把蛋白質與DNA、RNA、降解核酸、游離核苷酸及其它雜質區分開采用。
操作流程
1、建立標準曲線----樣品處理---讀取分析數據;
2、Qubit® 分析試劑盒,能精確定量樣品初始濃度范圍為:12.5 ug/mL~5mg/mL的蛋白質樣本。
