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SDS-PAGE十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳測量蛋白含量

來源:北京高瑞森科技有限公司   2024年12月16日 16:32  
  原理
 
  根據檢體中蛋白質分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。蛋白質的遷移率主要取決于它的相對分子質量,而與所帶電荷和分子形狀無關。
 
  SDS-PAGE是在聚丙烯酰胺凝膠系統中加入陽離子去污劑(SDS)--SDS能斷裂分子內和分子間氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白質的二級和三級結構;分子被解聚成多肽鏈,解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束,所帶的負電荷具有相同密度,且大大超過了蛋白原有的電荷量,從而掩蓋了不同種類蛋白質間原有的電荷差別。這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。多肽結合SDS的量只與其分子量成正比,而與多肽序列無關,所以SDS多肽復合物在丙稀酰胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關。
 
  當分子量在15KD到200KD之間時,蛋白質的遷移率和分子量的對數呈線性關系,符合下式:logMW=K-bX。式中:MW為分子量,X為遷移率,k、b均為常數,若將已知分子量的標準蛋白質的遷移率對分子量對數作圖,可獲得一條標準曲線,未知蛋白質在相同條件下進行電泳,根據它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量。

 

  操作步驟
 
  1、凝膠的制備,包括分離膠和濃縮膠(也可直接購買成品膠)
 
  2、電泳步驟:處理樣品——上樣——加入緩沖液——接通電源進行電泳——凝膠板剝離——染色——脫色——漂洗——拍照——實驗結果分析

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