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齊一生物科技（上海）有限公司 |  資料大小 |
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52次 |
植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
測定意義：
淀粉酶負責水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉
中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降
低，因此又稱為液化酶。
測定原理：
還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱，在 70℃鈍化 15min，從而
測定α-淀粉酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：25mL×1 瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需加熱溶解后再用；
試劑二：20mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?br />稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本） ，加 1 mL 蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心管中，
在室溫下放置提取15min，每隔5min 振蕩 1次，使其充分提?。?000g，室溫離心 10min，
吸取上清液并且加蒸餾水定容至 10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。
操作步驟和加樣表（在1.5mLEP 管中依次加入下列試劑） ：
1、分光光度計預熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。
1、β-淀粉酶滅活：
試劑（μL） 對照管 測定管
α-淀粉酶原液 250 250
70℃水浴15min 左右，冷卻
2、加入試劑一并且保溫：
試劑一 500
將以上對照管、測定管和試劑二置于 40℃恒溫水浴中保溫 10min 左右
3、準確反應 5min
試劑二 250 250
在 40℃恒溫水浴中準確保溫 5min
4、加入試劑一，并且混勻
試劑一 500
混勻，室溫靜置 10min，蒸餾水調(diào)零，540nm 處讀取對照管和測定管吸光度，計算ΔA=A
測定管-A對照管。
植物α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說明書α-淀粉酶活性計算：
1、標準條件下測定回歸曲線為 y=0.0895x -0.022； x 為標準品濃度（mg/mL） ，y 為吸光值。
2、α-淀粉酶活性
（1）按照樣本質(zhì)量計算
單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。
α-淀粉酶活性(U/g 鮮重)=[(ΔA＋0.022)÷0.0895×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=89.4×(ΔA＋
0.022)÷W
（2）按照蛋白質(zhì)含量計算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為1 個酶活性單位。
α-淀粉酶活性(U/mg prot)= [(ΔA＋0.022)÷0.0895×V反總]÷ （V樣×Cpr） ÷T=8.94×(ΔA＋0.022)
÷Cpr
V 反總：反應體系總體積，1mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提
取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，
5min。
