聯系電話
齊一生物科技（上海）有限公司
初級會員·11年
- 聯系人：
- 程成
- 電話：
- 021-60348496
- 手機：
- 18121453965
- 傳真：
- 021-51632657
- 地址：
- 上海市松江加工園區
- 網址：
- www.qiyibio.com
掃一掃訪問手機商鋪
微信掃碼進入微名片
 提 供 商 |
齊一生物科技（上海）有限公司 |  資料大小 |
13.8KB |
|---|---|---|---|
 資料類型 |
JPG 圖片 |  資料圖片 |
|
 下載次數 |
47次 |
展青霉素酶聯免疫試劑盒
1．概述
展青霉素酶聯免疫反應測試盒是利用競爭性的酶聯反應原理，用于飼料、蜂蜜、肉類（牛肉、雞肉和豬肉）、魚蝦、牛奶、組織、血清和尿液中展青霉素殘留的定量檢測。
該試劑盒具有以下特點：
- 快速，高回收率(75-95%)，多種樣品的低成本提取方法。
- 高靈敏度（0.1ng/g或ppb），低檢測下限（牛奶0.5ng/g或ppb）。
- 高重復性。
- 檢測過程只需要不到1.5小時。
展青霉素酶聯免疫試劑盒2．試劑盒原理
展青霉素酶聯免疫反應測試盒基于競爭性酶聯反應原理，含有展青霉素的抗體已經包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同酶標抗原被添加到板孔中。如果樣品中含有藥物，會競爭抗體，抑制抗體與酶標抗原結合。加入底物后，產物的顏色強弱與樣品中藥物的濃度成反比。
3．試劑盒組成
內容物 | 規格 | 保存條件 |
展青霉素抗體包被板 | 96孔板（12×8 孔） | 2-8℃ |
展青霉素標準品： 0ng/ml陰性質控 0.1ng/mL 0.25ng/mL 0.6ng/mL 1.5ng/mL 5.0ng/mL 回收用1000ng/ml |
1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL 1.8mL | 2-8℃ |
酶標（patulin-HRP) | 6mL | 2-8℃ |
10×樣品提取液(10X Sample Extraction Buffer ) | 25mL | |
20×濃縮洗液(Wash Solution) | 28mL | |
終止液(Stop Buffer) | 14mL | |
TMB底物(TMB Substrate) | 12mL |
本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過1個月不使用試劑盒，請
將展青霉素HRP酶標記物 放置-20℃或者冰凍保存。
展青霉素酶聯免疫試劑盒
4．檢測限
檢測物質 | 檢測下限（ng/g） |
飼料 | 1 |
蜂蜜 | 2 |
肌肉/肝臟/腎臟/魚類/蝦 | 1 |
牛奶 | 0.5 |
血清 | 0.5 |
尿液 | 0.5 |
5．交叉反應
藥物 | 交叉反應% |
展青霉素(patulin) | 100 |
惡喹酸(Oxolin acid) | 40 |
吡哌酸(Pipemidic acid) | 18 |
氧氟沙星(Ofloxacin) | 17 |
環丙沙星(Ciprofloxacin) | 9 |
恩諾沙星(Enrofloxacin) | 6 |
氟甲喹(Flumequin) | 6 |
西諾沙星(Cinoxacin) | 1 |
6．未提供的設備或材料
- 酶標儀
- 恒溫培養箱
- 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
- 漩渦振蕩器
- 勻質器
- 多道移液器（50-300mL）
7．注意事項
實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得實驗效果。
- 標準品中含有展青霉素，請小心使用。
- 不要使用過期的試劑盒。
- 不同批次的試劑盒不要混用，酶標記物和微孔板具有盒與批次的特異性。確保其正確使用。
- 盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱蒸發。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。
- 水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。
- 加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。
- 孵育時間的計算越規范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。
- 從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。
- 將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。
8．試劑的準備
所有的試劑在使用之前應將其回溫至室溫，并在使用試劑前搖動幾下，以保證合理的濃度。
（1）1×樣品提取液
按1：9的比例配制10×樣品提取液和蒸餾水。
（2）35%的(甲醇)/(樣品提取液)溶液
按6.5：3.5的比例配制1×樣品提取液和100%的甲醇。
9．樣品的準備
(樣品在使用前請保存在2-4°C下)
飼料
- 取一定量的樣品，添加5倍的70%的甲醇（如：1g樣品中加入5mL的70%的甲醇），漩渦振蕩混勻；
- 取1.5mL勻質樣品，室溫下4000g離心5分鐘。
- 取0.5ml 上清液，加入0.5ml 1x 樣品提取液，混勻。
- 每孔取100μl用于檢測。
稀釋倍數：10
蜂蜜
- 稱取0.1g蜂蜜樣品，加入1.9ml的35%乙醇/樣品提取液，混勻
- 每孔取100ul用于檢測。
稀釋倍數：20
肉類/肝臟/腎臟/魚/蝦
- 取1g 勻質去脂肪樣品，加入4ml 70% 甲醇。
- 轉速渦流震蕩10分鐘。
- 室溫下4000g 離心5分鐘。
- 取0.5ml 上清液，加入0.5ml 1x 樣品提取液，混勻。
- 每孔取100μl用于檢測。
稀釋倍數：10
牛奶
- 有脂肪的奶粉，取1ml牛奶，4000g離心5分鐘，去除上層脂肪。(脫脂奶粉省略這一步)
- 取200μl牛奶樣品，加入800μl 35% 甲醇/樣品提取液，混勻。
- 每孔取100μl 用于檢測。
稀釋倍數： 5
血清/尿液
- 取0.5mL 樣品，在4000g離心5分鐘；
- 取,0.2 mL上清液，加入0.8mL 35% 甲醇/樣品提取液，混勻。
- 每孔取100μl 進行檢測。
稀釋倍數：5
10．酶聯免疫反應測試步驟
所有試劑使用前回到室溫，試驗中用到的試劑現用現配，多余的試劑不能倒回原先的瓶子里，避免試劑的交叉污染。
1×工作洗液
按1：19的比例配制濃縮洗液和雙蒸餾水。
檢測
以下為計算份量的表格，用戶可根據自己的需要來確定需要配置多少試劑。
試劑 | 每個反應需要的體積 | 24次反應的體積 |
酶標 | 50 mL | 1.2mL |
工作洗液 | 2 mL | 48 mL |
終止液 | 100 mL | 2.4 mL |
底物 | 100 mL | 2.4 mL |
- 加入100mL的標準液或樣品于所設定的孔中；
- 每孔加入50mL 酶標（避免陽光直射和工作臺溫度過低，孵育時適當覆蓋微孔板）；
- 室溫（20-25℃）孵育60分鐘；
- 洗板3次，每次應該加入250mL，一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；
- 加入100mL的TMB底物（底物本身是無色的，出現顏色變化不能使用。孵育時適當覆蓋微孔板）；
- 加入底物后立即計時，輕敲試劑盒使混勻；
- 在室溫下培養15分鐘，加入100mL的終止液終止反應，在450nm下讀OD值(讀數前用無絨布擦拭微孔底部水分和指模)。
11．結果計算
（1）分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。
相對吸光度值 (%) =(標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100
（2）以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。
（3）從標準曲線上讀取質控和樣品的濃度值。
展青霉素酶聯免疫試劑盒備注：如結果呈陽性反應，應該用其他檢驗方法（如色譜/質譜方法等）進行確證。
以下曲線圖是展青霉素酶聯免疫反應測試盒典型標準曲線
