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齊一生物科技（上海）有限公司 |  資料大小 |
71.8KB |
|---|---|---|---|
 資料類型 |
JPG 圖片 |  資料圖片 |
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212次 |
蔗糖（sucrose）含量試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測
蔗糖（sucrose）含量試劑盒說明書測定意義：
蔗糖是植物光合作用的主要產物，也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此，測定蔗糖含量對 于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產品質 量控制的重要指標之一。
測定原理：
先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖， 果糖進一步與間苯二酚反應，生成有色物質，在 480nm 下有特征吸收峰。 所需的
儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
蔗糖（sucrose）含量試劑盒說明書試劑的組成和配制：
提取液：液體 100ml×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 2.5ml×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 40ml×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體 10ml×1 瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑 0.5g×1 瓶，常溫保存。
蔗糖提取：
稱取 0.1~0.2g 樣本，常溫研碎，加入 1mL 提取液，適當研磨后快速轉移到離心管中，置于 80℃水浴鍋中 10min，振蕩 3~5 次，冷卻后，4000g，25℃離心 10min，取上清，加入
2mg 試劑五，80℃脫色 30min，再加入 1mL 提取液，4000g，25℃離心 10min，取上清液測定。
測定操作表（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：
試劑（μL） 空白管 標準管 測定管
樣本 100
試劑一 100
蒸餾水 100
試劑二 50 50 50
混勻，沸水浴煮沸 5min 左右（蓋緊，防止水分散失）
試劑三 700 700 700
試劑四 200 200 200
混勻，沸水浴 30min，冷卻后 480nm 處蒸餾水調零，空白管、標準管和測定管分別記為
A1、A2 和 A3。
蔗糖（sucrose）含量試劑盒說明書蔗糖含量計算：
1、按照蛋白質含量計算
蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 標準管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測定蛋白濃度。
2、按照樣品質量計算
蔗糖含量(mg/g 鮮重)=(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。 C 標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，2mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
注意：zui低檢測限為 100ng/g 鮮重或 1ng/mg prot
